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La Lic. Marlen Mayorga Flores presentó el examen para obtener del grado de
Maestra en Ciencias Químicas con el trabajo de tesis:
Clonación, expresión y
purificación de la proteína Hev b 3 de Hevea brasiliensis
. Su tutora fue la Dra.
Adela RodríguezRomero(DepartamentodeQuímicadeBiomacromoléculas).
La proteína Hev b 3, o también denominada
small rubber particle protein
(SRPP), está involucrada en regular la producción del caucho natural
presente en el látex de
Hevea brasiliensis
. Para entender el mecanismo por el
cual la Hev b 3 favorece la síntesis bioquímica del cis-poliisopreno (caucho
natural), es necesario biosistetizar y purificarla para posteriormente obtener
su estructura mediante difracción de Rayos-X.
La proteína Hev b 3 se clonó y expresó, usando técnicas de biología
molecular; para la purificación se utilizaron cromatografías de afinidad e
intercambio aniónico. Se caracterizó por espectrometría de masas MALDI-
TOF, obteniendo una masa de 22,6 kDa coincidente con la masa teórica, y
finalmente, mediante la técnica de dicroísmo circular se obtuvo un estimado
de su estructura secundaria.
Les extendemos una felicitación a ella y a su tutora.
Fecha de examen: 23 de enero de 2015.
Dra. Adela Rodríguez Romero y la M. en C.
Marlen Mayorga Flores.
Dra. Carol Siseth Martínez Caballero y la Dra. Adela
Rodríguez Romero, en la Unidad de Posgrado.
La M. en C. Carol Siseth Martínez Caballero realizó el examen para obtener
el grado de doctora en el Programa de Maestría y Doctorado en Ciencias
Bioquímicas, con la asesoría de la Dra. Adela Rodríguez Romero. Su
proyecto de tesis se tituló:
Caracterización estructural y funcional de dos
proteínas tipo quitinasa de Hevea brasiliensis con actividad de lectina.
En este trabajo se clonaron, expresaron y caracterizaron dos proteínas tipo
Quitinasa (PTQs) de
H. brasiliensis
relacionadas a la familia 19 de glucósido
hidrolasas (GH19). La HbPTQ1 presentó una identidad de secuencia del
100% con el alérgeno Hev b 11.0101 (reportado por O´Riordan y cols. en
el 2002), mientras que la HbPTQ2 mostró una inusual repetición de treinta
aminoácidos correspondientes a la mitad del dominio de unión a quitina
(DUQ) del extremo C-terminal y a un conector. A pesar de la carencia de
actividad hidrolítica debido a una sustitución en el residuo E117A y E147A
en HbPTQ1 y HbPTQ2 respectivamente, ambas proteínas mostraron una
una fuerte interacción con quitina y un trisacárido de quitina (GlcNAc)
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;
así como actividad anti-fúngica sobre
Alternaria alternate
. Las estructuras
cristalográficas de los dominios individuales de HbPTQ1 revelaron que ésta
conserva el mismo plegamiento de las quitinasas activas relacionadas a la
familia GH19. Experimentos demodeladomolecular usando un hexasacárido
de quitina (GlcNAc)
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sugieren la participación de algunos residuos altamente
conservados, involucrados en la unión del azúcar, principalmente los residuos
aromáticos Trp171, Tyr173 y Phe207 que participan en interacciones polares
y apolares en los subsitios -4 a -2. Por otra parte, una reversión de la mutación
de Ala por Glu llevó a la recuperación de la actividad hidrolítica, indicando
que únicamente una mutación puntual produce un cambio en la función de
estas proteínas. Finalmente, la termoestabilidad de las mutantes activas fue
mayor que la exhibida por ambas HbPTQs, lo que sugiere que la pérdida de
actividad hidrolítica y la disminución de la termoestabilidad son sacrificadas
por una mayor capacidad de unión a la quitina.
Por este medio felicitamos a la graduada y a su tutora.
Fecha de examen: 21 de enero de 2015
.
